Informació
Un objectiu fonamental de la biologia estructural moderna és desxifrar l'organització cel·lular per dilucidar la disposició espacial dels complexos macromoleculars dins d'una cèl·lula. Estudis tridimensionals combinats amb mètodes de crio-preparació per a la microscòpia electrònica permeten l'estudi de mostres biològiques en un estat quasi in vivo "hidratat" i "tridimensional". Per tal de portar a terme aquests estudis, les mostres han de ser crio-immobilitzades, ja sigui per congelació per immersió, congelació per impacte, congelació autopressuritzada o per congelació a alta pressió. Aquests mètodes vitrifiquen l'aigua de la mostra i immobilitzen el contingut de la cèl·lula gairebé immediatament. L'objectiu és l'obtenció de gel "vitri" o amorf després d’una congelació ultra-ràpida, sense destruir les estructures cel·lulars i preservant el moment precís de les seves interaccions, les quals canvien ràpidament in vivo. La vitrificació permet la resolució espacial i temporal dels processos cel·lulars.
Una vegada es tenen les cèl·lules immobilitzades per congelació, es poden aplicar dues estratègies per tal d’estudiar la tridimensionalitat de les estructures d'interès: anàlisi de partícula individual i crio-tomografia electrònica. Les partícules individuals són macromolècules aïllades, agregats macromoleculars, petits orgànuls, petites estructures cel·lulars o petits organismes que no necessiten se tallats i el procediment que es duu a terme és la reconstrucció de les diferents orientacions de la partícula en una reixeta de microscòpia electrònica.
La crio-tomografia electrònica es refereix a la reconstrucció tridimensional de les estructures aïllades o de crio-seccions, adquirint imatges a baixa temperatura i en totes les direccions possibles del feix d'electrons. Això s'aconsegueix mitjançant la inclinació del suport de la reixeta que conté la mostra i adquirint imatges a intervals regulars d'inclinació. Recentment, l'ús de microscopis amb doble feix d'electrons i ions ha significat un gran avenç per a la preparació de mostres per a la crio-tomografia electrònica.
D'altra banda, la crio-substitució, juntament amb altres tècniques com Tokuyasu i els nous mètodes de rehidratació i mètodes VIS2FIX, també es poden combinar amb el marcatge inmuno-or sobre la secció per estudis de localització de proteïnes, aconseguint una bona morfologia. En aquest seminari es farà especial èmfasi sobre els mètodes CLEM (Correlative Light and Electron Microscopy) i els primers resultats per aconseguir una etiqueta clonable per microscòpia electrònica.
Data: 10/07/2013
Hora: 10:30h a 11:30h
Lloc: Aula dels CCiTUB. Edifici CCiTUB, 1ª planta. c/Lluís Solé i Sabarís, 1-3. Barcelona
Cost: Gratuït
Ponent: Carmen López, Tecnologia de Crio-Microscòpia electrònica dels CCiTUB
|
|
